蠕形螨是一种小型寄生螨类。种类繁多的蠕形螨广泛存在于自然界,但目前只发现两个种类发现寄居于人体,即毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨。在眼部,毛囊蠕形螨寄居于睫毛毛囊,而皮脂蠕形螨则寄居于睫毛皮脂腺和睑板腺。蠕形螨寄居眼部引起蠕形螨睑缘炎,病情反复发作,难彻底治愈。既往,治疗蠕形螨睑缘炎的药物主要有甲硝唑、金霉素眼膏、匹鲁卡品眼膏等[3,4,5],但容易复发,疗程长,效果不尽人意。近年,GaoYY进行的体外杀虫试验报道茶树油具有很好的体外杀虫效果,并已报道应用于临床。然而,茶树油对眼部的刺激作用限制了它的广泛应用。因而我们致力找寻一种既能有效杀螨而又刺激性小的药物。我们的前期工作已经采用80%乙醇热回流法对30种中草药提取物进行体外杀螨试验,并发现这些中草药的体外杀虫作用强弱不等。本文采用80%乙醇热回流提取法提取8种经过筛选的已知具有体外杀螨活性的中草药,将杀螨效果相近的中草药两两搭配,按体积1:1混合,分为4组,进行体外杀虫试验,观察在各组药物作用下眼部蠕形螨的活动情况及死亡时间,旨在探讨中草药提取物复方制剂是否有增效作用,以制定更好的杀螨方案。1材料
1.1供试药物根据我们的前期试验结果,挑选8种具有不同杀螨效果的中草药应用于本研究。将杀螨效果相近的中草药两两搭配,按体积1:1混合,分为4组,进行体外杀虫试验,分别为:
①丁香、苍耳子,
②蒲公英、荆芥,
③艾叶、苦参,
④黄柏、佛手柑。(所有药物均购自福建医科大学附属二院)1.2主要仪器双目光学显微镜(OLYMPUS),电热套(PTHW,河南豫华仪器有限公司),不锈钢电热蒸馏水器(上海路达实验仪器有限公司),高速中药粉碎机(HX-100,浙江省永康市溪岸五金药具厂),数显恒温水浴锅(江苏省金坛市江南仪器厂),循环水式真空泵(SHZ-D(III),河南省巩义市予华仪器有限责任公司),架盘药物天平(0g-500g,上海医疗器械八厂),可调式移液器(上海雷勃分析仪器有限公司)。其他耗材:铁架台、球形冷凝管、抽滤瓶、布式漏斗、磨口圆底烧瓶、温度计、真空弯管、胶管、定性滤纸、载玻片、盖玻片、乙醇等。2
方法2.1提取物的制备将中药材清洗、干燥、粉碎,称取每种药材粉末5g,共10g,均匀混合,置500mL圆底烧瓶内,加80%乙醇200mL,室温浸泡12小时,85℃水浴热回流提取2次,首次60分钟,第2次30分钟,合并提取液,放冷后真空抽滤,减压回收乙醇至无醇味,得到中草药乙醇提取物。2.2体外杀螨试验拔取上睑睫毛和采选带有圆柱状鳞屑或颜色异常、可疑蠕形螨寄居的睫毛,每上睑拔4根,共8根,将拔下的睫毛置于载玻片上,观察是否有蠕形螨存在。在确认有蠕形螨的睫毛上,盖上盖玻片,将20ul待测药液缓慢滴于盖玻片的侧缘,药液缓慢向对侧扩散,显微镜下观察游离的蠕形螨的活动情况,直至螨虫死亡。由于幼虫离开人体后很快死亡,故受试螨虫均选取活力好的成虫作为试验对象。每组药液跟踪15只螨虫。蠕形螨死亡判定标准:虫体肢节持续2min不动或虫体体表皱缩、变色、变形、内含物外泻等。3.2、统计学方法:采用MicrosoftExcel进行统计学分析,计量资料以均数±标准差表示,数据分析采用两两配对的t检验,复方制剂的体外杀虫时间和每组中草药的平均杀虫时间进行比较,P0.05为有统计学意义。3结果表一单种及两两合并的复方制剂对睫毛蠕形螨的体外杀虫试验(n=15)组别中草药名称杀螨时间(分钟)P值单种制剂平均值复方制剂组一丁香6.33±1.759.4±3.378.67±2.190.45苍耳子12.47±1.41组二蒲公英14.07±1.8321.63±8.0222.53±6.120.70荆芥29.20±2.68组三艾叶23.87±1.6424.83±2.2327.88±2.230.006苦参26.13±1.96组四黄柏27.07±2.1943.0±16.5442.53±8.860.92佛手柑58.93±4.27见表一,4组复方制剂中的三组的体外杀虫时间与每组中草药的平均杀虫时间比较无明显差别(P>0.05),其中组三艾叶和苦参制剂复方组杀虫时间高于平均杀虫时间(P=0.006)。4讨论由于中药在临床上的应用常采用复方制剂,我们对已知8种具有良好的体外杀灭蠕形螨作用的中草药提取物两两搭配,按体积1:1混合,分为4组,进行体外杀虫试验,旨在探讨中草药提取物复方制剂是否有增效作用,以制定更好的杀螨方案。这8种中草药中,丁香具有抗微生物、麻醉止痛、抗凝血、解热降温、保肝利胆和杀虫等多种生物活性;苍耳子主要功能为散风除湿,通鼻窍,抗菌,抗病毒,消炎,镇痛作用[10,11];蒲公英具有广谱抑菌,利胆保肝,抗内毒素,健胃,免疫促进等作用[10,12];荆芥具有抗病毒、抗炎、镇痛、抗氧化等作用;艾叶主要作用为散寒止痛,燥湿止痒,温经止血;苦参主要功能为清热燥湿,杀虫利尿;黄柏具有抗病原微生物、降血压等作用;佛手柑:对湿疹、皮炎、暗疮有帮助,有消毒杀菌、治伤口、增食欲、抗腹绞痛等作用。本研究结果显示4组复方制剂中的三组的体外杀虫时间与每组中草药的平均杀虫时间比较无明显差别(P>0.05),其中组三艾叶和苦参制剂复方组杀虫时间高于平均杀虫时间(P=0.006),说明艾叶、苦参复方制剂配伍对眼部蠕形螨体界外杀虫有拮抗作用。由于中草药有各自不同的功用,组合可互相辅佐起到消毒,杀菌,抗炎,抗病毒等综合作用,因此,采用中草药复方制剂是治疗蠕形螨睑缘炎的研究方向,本研究结果提醒大家在考虑中草药复合制剂治疗人体蠕形螨的同时,要注意其互相之间的拮抗作用。参考文献1RufliT,MumcuogluY.ThehairfolliclemitesDemodexfolliculorumandDemodexbrevis:biologyandmedicalimportance.Dermatologica,1981,162:1–11.2Z.Erbagcy,O.Ozgoztasi.ThesignificanceofDemodexfolliculorumdensityinosacea,Int.J.Dermatol,1998,37:421–425.3JunkAk,LukacsA,KampikA.TopicaladministrationofmetronidazolegelasaneffectivetherapyalternativeinchronicDemodexblepharitis--acasereport[J].KlinMonatsblAugenheilkd,1998,213
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