关于CAS9

Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeat(CRISPR)/Cas9是细菌和古细菌一种不断进化适应的免疫防御机制。CRISPR/Cas9利用一段小RNA来识别并进行有效的靶向DNA剪切。主要分为两个组成部分Cas9核酸酶和gRNA两部360问答分。原理是：Cas9结合gRNA，通过gRNA区础汽标顶上的靶点序列，在目标基因组上找例唱祖流操信到靶点序列，并揭开双螺旋，Cas9将剪切DNA双链，造成DNA双链断裂。Cas9使用简单，比较方便多个靶点同时操作。但是也比较容易脱靶，

现在CRISPR/Cas9靶向基因操划权外办作的应用

1.　细胞系的应用：共转染cas9质粒与gRNA质粒到细胞中，48小时后做突变率的苏检测，和后续的单克隆培养收呀通试织般群话或细胞株筛选工作。

小动物的基因敲除：体外转录cas9和gRNA成RNA，然后显微注射到动物的受精卵中。

大动物的基因敲除：先在原代细胞株中做好基因敲除（同细胞系方法），通过克隆动物技术，将基因敲除的细胞系的细胞核移植到去核的卵细胞中。

4.植物的基因敲除：已有成功案列。

5.微生物的基因敲除：需要表达载体和该物种具有NHEJ修复方式。

推荐公司：北京可在劳支室青划证唯尚立德生物科技有限公司，本人在其做过几次，效果挺好的。

标签：CAS9