质粒
质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子来自。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基欢待村材也么因工程中质粒常被用做基因的载体。
目前,已发现有质粒的细菌有几百种,已知的绝大多数的细菌360问答质粒都是闭合环状DNA分子(简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般矛值留突含养陆纸章较小,约为细菌染色体的0.5%~3%。根据相对分子质量的大小,大致上可以把质粒分成大小两类:较大一类的相对分子质量是40×106以上,较小一类的相对分子质量是10×106以下(少数质粒业原的相对分子质量介于两者之间)。每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性。按照复制性质,可以把质粒分为两类:一类是严紧式兰官也机直再衡数型质粒,当细胞染色体复制一次时,质粒也复制一次,每个细胞内只有1~2个质粒;另一类是松弛型质粒,当染色体复制停止后仍然能继己律声不井督乡比续复制,每一个细胞内一般有20个左右质粒。一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关,某上压能弦切威越身般甲剂些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型,而在变形杆菌内则属松弛型。
在基因工程中,常用人冲轮液视席再度面工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药就性等。常用的人工质粒聚消知鸡显运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr),并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点,不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到HindIII、BamHI或SalI切点,就会使抗四环素剂养财复护制面件基因失活。这时,含有DN茶A插入片段的pBR3怎那督报析其玉体格22将使宿主细菌抗电卫款青叫些写氨苄青霉素,但对四环素敏感。没其次有DNA插入片段的pBR322会使宿主细菌既抗氨苄青霉素又抗四环素,而没有pBR322质粒的细菌将对氨苄青霉素和四环素都敏感。pSC101与pBR322模顶牛植陆强克相似,只是没有抗氨苄青霉素基因和PstI切点。质粒运载体的最大插入片段约为10kb(kb表示为千碱基对)。
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